- 王潇乐;赵淑敏;刘之研;刘伟;普廷会;徐玺丰;王凯;杨王红;陈继军;
目的 构建一种基于重组流感病毒血凝素(haemagglutinin, HA)、重组神经氨酸酶(neuraminidase, NA)和重组基质蛋白(matrix protein 1,M1)的病毒样颗粒(virus-like particle, VLP),制备并评价其作为通用流感VLP疫苗的可行性。方法 设计生成马赛克神经氨酸酶(mosaic neuraminidase, mNA)基因序列，将其与流感病毒马赛克血凝素(mosaic haemagglutinin, mHA)基因序列和M1基因序列分别插入pFastBac1载体，得到相应重组供体，转化至DH10感受态细胞中，提取重组质粒并转染昆虫细胞获得包含目的基因的重组杆粒。将重组杆粒感染昆虫细胞进行蛋白表达与VLP组装，纯化VLP后用于小鼠免疫，判断其免疫原性与诱导能力。结果 成功构建了包含mHA、mNA和M1共3种目的基因的重组杆粒。mNA在昆虫细胞中成功表达。纯化后的样品在透射电子显微镜下观察到明显的球状结构、直径在100 nm左右的VLPs;动态光散射(dynamic light scattering, DLS)实验证明VLPs粒径分布均匀。制备的流感VLPs免疫小鼠后可以诱导小鼠血清抗体效价以及小鼠脾脏免疫细胞占淋巴细胞比率增高(P均<0.05)。结论 mHA、mNA和M1共3种蛋白在昆虫细胞中成功表达并组装形成VLPs, VLPs在小鼠体内可以诱导产生较好的体液免疫和细胞免疫应答。该形式的VLPs有进一步开发成为通用流感疫苗的可行性。
2025年04期 v.53 7-15页 [查看摘要][在线阅读][下载 8974K] [下载次数：113 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ] - 诸珏珉;党昱东;高飞霞;徐晓竹;马雷钧;罗剑;陈哲文;许博;
目的 制备麻疹病毒单克隆抗体，用于麻腮风联合减毒活疫苗的检定与质量控制。方法 采用ExpiCHO细胞表达系统制备2批麻疹病毒单克隆抗体，用固定病毒稀释血清的中和试验方法标定制备的单克隆抗体的中和效价，同时评估其中和效价稳定性、特异性干扰试验以及在麻腮风联合减毒活疫苗病毒病毒滴定中的应用。结果 制备的2批麻疹单克隆抗体中和效价均高于1∶500,可在-80℃保存下维持至18个月，具有良好的稳定性，同时该单克隆抗体对腮腺炎和风疹病毒均无干扰作用，在中和麻疹病毒后，可准确滴定麻腮风联合减毒活疫苗中腮腺炎病毒与风疹病毒的滴度，且滴定结果一致性较高。结论 制备的麻疹病毒单克隆抗体可用于麻腮风联合减毒活疫苗的检定与质量控制。
2025年04期 v.53 16-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 4432K] [下载次数：60 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ] - 王浇磊;谢莹;杨惠洁;赵慧;孙誉芳;权娅茹;李长贵;
目的 建立呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)A亚型黏附蛋白(attachment glycoprotein, G)双抗体夹心ELISA抗原检测方法，对RSV G mRNA疫苗体外抗原表达活性进行检测和定量。方法 以鼠单抗为包被抗体、兔多抗为检测抗体、抗兔酶标二抗为显示抗体建立G抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法，并对方法的准确度、精密度、耐用性及G抗原专属性进行验证。用建立的方法检测RSV G mRNA疫苗体外转染产物G抗原含量。结果 包被抗体、检测抗体、酶标抗体最佳稀释度分别为1∶1 000、1∶2 500和1∶2 000,抗原含量为15.6～250.0 ng/mL时拟合度良好(R~2>0.99),检测下限为4.3 ng/mL。准确度验证，各浓度样品回收率为85.0%～108.5%;重复性与中间精密度CV均<10%;不同储存时间包被板测得各浓度样品回收率为83.8～109.8%。建立的方法能够准确定量RSV G mRNA疫苗转染293F细胞后的G抗原表达量。结论 成功建立了RSV G抗原双抗体夹心ELISA检测方法，可快速定量RSV G mRNA疫苗体外表达G抗原含量，为RSV疫苗研发提供了评价方法。
2025年04期 v.53 21-26页 [查看摘要][在线阅读][下载 759K] [下载次数：116 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 郭旭梦;罗敏;邹文琪;申瑷琳;程小玲;施金荣;
目的 对口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗(Vero细胞)重组胰蛋白酶残留量测定方法进行验证。方法 用ELISA测定标准品溶液和供试品溶液的A_(450 nm)值；以标准品浓度的对数值为自变量x,以其对应的吸光值的均值为因变量y,建立四参数拟合曲线，此方程的决定系数(coefficient of determination,R~2)≥0.99;利用拟合方程计算供试品溶液中的重组胰蛋白酶含量。对该方法进行定量限、准确度、精密度、耐用性和专属性验证。结果 重组胰蛋白酶浓度在0.156～10.000 ng/mL范围内方程拟合度良好(R~2≥0.99);重复性验证，单次病毒收获液变异系数(coefficient of variation,CV)为5%;单价原液CV为5%;准确度验证，回收率单价原液的回收率在91%～99%;单次病毒收获液的回收率在94%～118%;中间精密度验证，单次病毒收获液CV为6%;单价原液CV为4%;耐用性验证，不同温度孵育和显色时间的结果均CV<15%;定量限验证，当重组胰蛋白酶浓度处于0.156 ng/mL时回收率为104%～112%,CV为3%,因此定量限为0.156 ng/mL;专属性验证，当牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)存在时重组胰蛋白酶的回收率在104%～110%;在生产辅料溶液存在时重组胰蛋白酶的回收率在101%～115%,辅料对检测无干扰。结论 口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗(Vero细胞)重组胰蛋白酶残留量测定方法的准确度、精密度、耐用性和专属性均符合可接受标准，适用于口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗(Vero细胞)重组胰蛋白酶残留量的检测及质量控制。
2025年04期 v.53 27-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 150K] [下载次数：71 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 刘伟;周鹏;王潇乐;刘之研;赵淑敏;郑浩宁;宋兰兰;南建军;王建锋;
目的 利用大肠埃希菌(大肠杆菌)重组表达并纯化A型肉毒毒素Hc片段(BoNT/A-Hc),并以该蛋白免疫小鼠研究其免疫原性及免疫血清的中和保护效果。方法 将A型肉毒毒素Hc片段基因序列进行优化后连接在原核表达载体pET-22b(+)上，构建了pET22b-AHc原核表达载体，利用大肠杆菌BL21(DE3)表达重组Hc蛋白并进行纯化；使用重组蛋白免疫BALB/c小鼠探究其免疫原性，利用免疫血清进行体外中和试验探究其中和效果并计算血清中和A型肉毒毒素的抗体效价。结果 成功构建了A型肉毒毒素Hc片段表达载体，利用大肠杆菌诱导表达并通过纯化获得了重组BoNT/A-Hc蛋白。SDS-PAGE结果显示，目的蛋白在菌体内得到表达；Western blot结果显示，表达的蛋白可以和A型肉毒毒素血清抗体特异性结合；小鼠血清中和试验结果显示，小鼠免疫血清经高倍稀释后可以完全中和4 LD_(50)的A型肉毒毒素，计算得到血清保护效价为1∶2 238.7。结论 成功构建了pET22b-AHc原核表达载体并在大肠杆菌内获得了高效表达，获得的重组A-Hc蛋白具有良好免疫原性，重组A-Hc蛋白免疫后的小鼠血清具有良好的中和效果与保护作用。为肉毒毒素亚单位疫苗研发及抗肉毒毒素单克隆抗体的抗原设计奠定了基础。
2025年04期 v.53 33-39页 [查看摘要][在线阅读][下载 3742K] [下载次数：119 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 姚永鹏;张子昌;李松;朱慧;黄杰;
目的 比较3型肺炎球菌荚膜多糖与CRM197蛋白3种不同结合方式制备的结合物的差异，为肺炎球菌结合疫苗的结合工艺方法提供了选择依据。方法 方法1:使用己二酸二酰肼(adipic acid dihydrazide, ADH)作为3型肺炎球菌多糖的连接剂，然后与CRM197蛋白通过缩合剂结合，形成具有酰胺键的大分子结合物；方法2:使用氧化剂将3型肺炎球菌多糖的邻位羟基氧化为醛基，然后与CRM197蛋白通过还原胺化反应，形成具有碳氮键的大分子结合物；方法3:先将CRM197蛋白用ADH衍生，然后与氧化后的3型肺炎球菌多糖通过还原胺化反应，形成具有碳氮键的大分子结合物。比较3种不同结合方式的结合物的Mn、游离多糖、Mw/Mn以及免疫原性等方面的参数。结果 方法1结合方式制备的结合物Mw为1.059×10~7,Mw/Mn为1.248,IgG抗体水平为4.53 lg;方法3结合方式制备的结合物Mw为6.318×10~6,Mw/Mn为1.252,IgG抗体水平为4.62 lg,这2种结合方式的游离多糖含量低，免疫原性好；方法2的结合方式制备的结合物Mw为2.889×10~6,Mw/Mn为1.874,IgG抗体水平为3.80 lg,游离多糖含量高，免疫原性比方法1和3结合方式的结合物差。结论 方法1和方法3结合方式制备的3型肺炎球菌结合物有较好的免疫原性。
2025年04期 v.53 40-46页 [查看摘要][在线阅读][下载 6569K] [下载次数：75 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 张逸驰;边雅静;李媛媛;
目的 研究3种昆虫细胞无血清培养基对昆虫细胞生长状况及目的蛋白产量的影响，为昆虫细胞上游发酵培养基筛选奠定基础。方法 使用SFX-Insect培养基、Sf 900 Ⅲ及Insect CD Medium共3种商业化培养基对昆虫细胞系(Sf9细胞和High-Five细胞)进行培养。通过比较2种细胞在3种培养基中的适应能力、生长情况，以及目的蛋白表达量与质量，对3种培养基进行适用性评价。结果 通过系统评估SFX-Insect、Sf 900 Ⅲ和Insect CD Medium对Sf9及High-Five细胞的适配性，Sf9/SFX-Insect组合展现卓越性能(最大活细胞密度9.70×10~6个/mL,蛋白产量165 mg/L);High-Five/Sf 900 Ⅲ组合具有高蛋白产量(160 mg/L)和高病毒滴度(8×10~7 PFU/mL)优势；Sf 900 Ⅲ培养基对不同细胞培养有更强的兼容性和适用性。结论 对3种常用工业级培养基进行多维评价分析，得到了Sf9/SFX-Insect和High-Five/Sf 900 Ⅲ两种昆虫细胞培养优势组合。
2025年04期 v.53 47-54页 [查看摘要][在线阅读][下载 11832K] [下载次数：139 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 岳胜兰;张雪;李娟;彭焱;周雁翔;朱晨;王上;纪德铭;胡勇;周志军;
目的 完成从血浆中纯化人纤维蛋白溶酶原(plasminogen, Pg)的层析工艺贯通，并进行中试规模的工艺重复性及质量稳定性分析。方法 通过在血浆过滤后增加Q层析(强阴离子交换层析),在亲和层析后增加SP层析(强阳离子交换层析)来完成从血浆中制备Pg的三步层析的串联，对三步层析的过程样品进行5种凝血因子及Pg的效价检测，各种血浆蛋白的抗原含量检测，通过计算回收率来分析不同血浆蛋白的分布及层析的纯化效果。在此基础上加入有机溶剂/去污剂(solvent/detergent, S/D)灭活和超滤浓缩步骤，完成用层析工艺制备Pg的贯通，直到获得Pg原液。进行8次中试规模的层析工艺重复生产，通过分析Pg原液的工艺控制指标(抗原回收率、活性回收率)及质量控制指标(比活性和纯度),验证该工艺的重复性及质量的稳定性。结果 三步层析串联的实验结果显示，Pg亲和层析前加入Q层析去除了过滤后血浆中100.00%的FII和FX,95.86%的FVIII、98.13%的FIX和58.66%的FVII,其流穿液中残留的FVII、FVIII和FIX也几乎在Pg亲和层析步骤被去除；Q层析流穿液中除了IgM、CER、FNC的抗原回收率稍低外，其他血浆蛋白的抗原回收率均≥90.88%,与过滤后血浆的主要蛋白组成类似；Pg亲和洗脱液的Pg抗原总回收率为88.15%,可检测出的主要蛋白为微量的IgG、IgA、IgM和Alb; SP层析在保持对Pg较高回收率的情况下(SP层析洗脱液中Pg抗原回收率91.95%,活性回收率109.22%),又能去除上样液中残留的约55.14%的IgG、65.17%的IgA、38.81%的IgM和76.89%的Alb;血浆经过三步层析后能检测出的杂蛋白中，除IgM残留为0.01%左右，其余蛋白几乎无残留。8批中试生产的结果显示，血浆过滤的抗原回收率为85.01%±11.47%,活性回收率为86.54%±10.91%;Q层析的抗原回收率为102.17%±4.20%,活性回收率为98.07%±6.30%;亲和层析载量在1.55～2.69 g/L时，Pg抗原回收率为84.20%±3.16%,活性回收率为96.66%±5.17%;S/D灭活的抗原回收率为107.60%±7.36%,活性回收率为102.25%±8.84%;SP层析载量在9.87～17.22 g/L时，Pg抗原回收率为92.27%±3.44%,活性回收率为102.70%±8.84%;超滤步骤的抗原回收率为97.41%±4.32%,活性回收率为92.00%±7.17%。除血浆过滤步骤的回收率的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)>10%外，其他步骤的回收率的RSD均<10%。从原料血浆到原液的8批中试生产的总回收率分别为抗原70.49%±10.09%,活性83.96%±8.26%,8批原液的相对纯度为75.03%±3.22%,分子筛-高压液相色谱(molecular sieve-high pressure liquid chromatography, SEC-HPLC)的纯度为96.79%±1.16%,比活性为(11.17±0.78) U/mg,原液的质量控制和工艺控制指标的RSD均<15%。结论 用层析工艺能稳定地从血浆中制备出达到企业标准的Pg原液。
2025年04期 v.53 55-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K] [下载次数：48 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 蒲郑君;段刚;杨茗云;王文斟;聂术君;黄凯雄;田莉虹;廖春艳;
目的 分析2023年重庆市1例流行性脑脊髓炎病例的病原种类及基因组特征。方法 实时荧光PCR检测分离株和密接者鼻咽拭子中脑膜炎奈瑟菌(简称脑膜炎球菌)基因片段，对病例中分离到的脑膜炎球菌进行血清分群、药敏试验和基因组测序，结合PubMLST下载的43株脑膜炎球菌序列对菌株的遗传进化关系、耐药基因及抗原基因进行分析。结果 实时荧光PCR结果显示病例和4个密接者均携带B群脑膜炎球菌。病例标本中分离出1株B型脑膜炎球菌，抗原分子式为B:P1.20,23-3:F1-91:ST-5664(CC4821);耐药基因分析显示该菌株存在喹诺酮类耐药相关基因gyrA和β-内酰胺耐药相关基因penA,对青霉素、环丙沙星、复方新诺明、萘啶酸4种抗生素耐药。结论 病例分离株基因型为ST-5664(CC4821) B群脑膜炎球菌。该菌株具有多重耐药，国内目前缺乏有效B群脑膜炎球菌疫苗，应重点关注B群脑膜炎球菌在国内的流行情况，为疫苗研发提供流行病学基础。
2025年04期 v.53 61-68页 [查看摘要][在线阅读][下载 10640K] [下载次数：72 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 王小丽;程真真;邓丽君;李国伟;孟庆玉;
目的 了解2017—2024年郑州市流行性感冒(简称流感)的流行特征变化及流感疫苗接种情况，为本地制定切实可行的流感防控策略提供科学依据。方法 通过中国流感监测信息系统和河南省免疫规划信息管理系统分别选取2017年1月1日至2024年12月31日的郑州市流感哨点医院监测数据和流感疫苗接种数据，采用描述性流行病学方法，分析流感样病例(influenza-like illness, ILI)的发病特征及流感疫苗的接种率。结果 郑州市2017—2024年ILI就诊百分比(ILI%)呈逐年上升趋势(APC=15.690%,P=0.012),流感病毒核酸阳性率和流感疫苗接种率趋势变化均无统计学意义(APC=-3.550%,P=0.647;APC=14.780%,P=0.069)。2017—2019年流感流行呈现冬春季高峰，2020年基本无流感流行，2021年呈高度散发态势，2022年出现秋季高峰，2023年和2024年出现冬春季高峰；ILI%无明显季节性特征。从人群分布看，2017—2024年仅5～<15岁组ILI%呈逐年上升趋势(APC=33.310%,P=0.002);不同性别流感病毒核酸阳性率差异无统计学意义(χ~2=0.113,P=0.737)。不同哨点医院ILI%和流感病毒核酸阳性率差异均有统计学意义(χ~2=13 882.123,P<0.001;χ~2=20.376,P<0.001)。2017—2024年A(H3N2)亚型、A(H1N1)pdm09亚型、B(Victoria)系交替流行，2020—2024年无B(Yamagata)系流感病毒流行。2017—2024年郑州市流感疫苗接种主要集中在9～12月(85.638%);0～<5岁组接种率最高(26.753%),其次为5～<15岁组(9.226%)。结论 郑州市2017—2019年流感呈冬春季流行，2020年处于低水平流行，2021年10月起开始逐步恢复至2017—2019年水平。流感疫苗接种率较低。2020—2022年所采取的呼吸道传染病非药物干预措施对ILI%影响较明显。建议继续强化监测，提高流感疫苗接种率，加强全人群非药物干预措施的宣传。
2025年04期 v.53 69-75页 [查看摘要][在线阅读][下载 4791K] [下载次数：168 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 訾慧;
目的 了解2024年驻马店市健康人群血清中白喉、破伤风和百日咳抗体水平，为驻马店市更好地开展疾病防控工作及优化免疫政策打好科学基础。方法 采用分层随机抽样的方法，选取2个县区1～79岁健康人群开展问卷调查并采集血清样本，用酶联免疫吸附实验(enzymelinked immunosorbent assay, ELISA)检测血清中白喉、百日咳和破伤风IgG抗体水平，分析其阳性率和抗体几何平均浓度(geometric mean concentration, GMC)。结果 630名调查对象中，白喉、百日咳和破伤风IgG抗体阳性率分别为78.730%、17.143%和69.683%,GMC分别为0.043、4.387和0.044 IU/mL。男女比例为0.689∶1,破伤风IgG抗体阳性率男性高于女性，差异有统计学意义(P=0.023);白喉和百日咳IgG抗体GMC在性别间差异均有统计学意义(白喉：P=0.001;破伤风：P<0.001)。白喉和破伤风IgG抗体阳性率在>1～3岁组均为100.000%,GMC分别为0.122 IU/mL和0.228 IU/mL,并随年龄增长逐渐降低。百日咳IgG抗体阳性率和GMC在>5～7岁组最低(6.000%,1.757 IU/mL)。>1～15岁有吸附无细胞百白破联合疫苗(diphtheria, tetanus and acellular pertussis combined vaccine, DTaP)接种史人群的接种率为100.000%;白喉和破伤风抗体阳性率、GMC均随免疫间隔时间的延长而降低，且差异均有统计学意义(P均<0.001),而百日咳仅IgG抗体GMC差异有统计学意义(P=0.018)。结论 驻马店市2024年1～79岁健康人群白喉抗体阳性率达到群体免疫标准但GMC偏低；百日咳及破伤风抗体阳性率均较低，存在年龄组保护不足和传播风险，青少年和成人群体的低百日咳抗体水平尤为明显。建议加强青少年及成人疫苗补种、引入Tdap联合疫苗并建立标准化检测体系，以降低相关疾病暴发风险。
2025年04期 v.53 76-81页 [查看摘要][在线阅读][下载 149K] [下载次数：108 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ]