- 徐康维;葛君;孙娇娇;王开芹;郭丽丽;万文妍;杨洋;卢锦标;李建强;权娅茹;
目的 评价含有不同佐剂的重组带状疱疹疫苗在小鼠中的体液和细胞免疫效果，以筛选更佳的复合佐剂。方法 将不同作用机制的CpG寡核苷酸（简称CpG）和皂苷QS-21两种佐剂，分别或者共同与重组水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus, VZV）糖蛋白E(gE)配伍制备疫苗，免疫小鼠后，采用酶联免疫吸附分析（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）和酶联免疫斑点（enzyme-linked immunospot assay, ELISPOT）试验评价不同佐剂组合的候选疫苗诱导的体液免疫应答和细胞免疫应答。结果 相比于单一佐剂CpG或QS-21,QS-21+CpG复合佐剂可诱导小鼠产生更强的体液免疫应答和细胞免疫应答。其中，体液免疫方面，gE+QS-21+CpG组IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度可分别达到5.3 lg、5.1 lg和4.7 lg，均高于gE+CpG组和gE+QS-21组，差异均有统计学意义（P<0.05或0.001）；细胞免疫方面，gE+QS-21+CpG组抗原特异性分泌IFN-γ的细胞明显增多，达到（38.9±12.6）SFC/万个细胞，与其他组的差异均有统计学意义（P均<0.000 1）。结论 新型复合佐剂QS-21+CpG能同时显著增强重组带状疱疹疫苗在小鼠中的体液和细胞免疫应答，可作为开发新型重组带状疱疹疫苗的理想佐剂。
2026年01期 v.54 1-6页 [查看摘要][在线阅读][下载 1488K] [下载次数：146 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 段小祥;阳雨虹;王玄源;刘静;徐磊;黄栋;刘娜;罗志宇;孙玉珠;喻刚;
目的 对Sabin株脊髓灰质炎（简称脊灰）灭活疫苗（Vero细胞）单价纯化病毒液中蛋白成分及特异性进行分析鉴定，以了解单价纯化病毒液抗原构成和质量特性，为疫苗的安全性和有效性的判断提供一定的药学依据。方法 采用Vero细胞微载体生物反应器发酵工艺生产脊灰单价病毒收获液，经超滤浓缩、凝胶过滤层析和离子交换层析生产工艺获得单价纯化病毒液。采用细胞中和法对单价纯化病毒液的型别进行鉴定；采用ELISA检测单价纯化病毒液的宿主细胞蛋白残留量、牛血清白蛋白残留量；采用定量PCR(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测单价纯化病毒液的宿主细胞DNA残留量；采用高效液相色谱法（high pressure chromatography, HPLC）分析单价纯化病毒液的纯度；采用透射电镜观察单价纯化液的病毒形态及大小特性；采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE）分析单价纯化液的蛋白条带构成；采用液质联用仪的方法（liquid chromatography-mass spectrometry, LC/MS）对各型单价纯化病毒液所含的蛋白成分进行鉴定；各型单价纯化病毒液经病毒灭活后制备单价原液，单价原液配制3批半成品，采用大鼠法对半成品的体内效力进行检测。结果鉴别试验结果显示，各型别单价纯化病毒液的病毒型别无误。各型别单价纯化病毒液的宿主细胞蛋白残留量均<0.500 ng/剂，宿主细胞DNA残留量均<2.00 pg/剂，牛血清白蛋白残留量均<0.200 ng/剂，病毒抗原纯度均为100%。电镜观察结果显示，各型纯化病毒液中均可见直径25～30 nm的典型脊灰病毒形态；各型别单价纯化病毒液均可见脊灰病毒VP0、VP1、VP2、VP3蛋白条带；各型别单价纯化病毒液中，相应血清型脊灰病毒基因组编码蛋白为主要组分，猴源性和牛源性杂质蛋白谱基本一致。大鼠效力试验结果显示，3批次半成品各型ED_(50)均不显著低于参考疫苗。结论 各型单价纯化病毒液均为含有效D抗原成分的高纯度病毒溶液，经病毒灭活后制备的半成品免疫原性良好，其质量特性均满足Sabin株脊灰灭活疫苗商业化生产要求。
2026年01期 v.54 7-19页 [查看摘要][在线阅读][下载 1494K] [下载次数：104 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 毛心蕊;曹存巍;苑庆华;
目的 针对曲霉菌抗原检测试剂盒的不足以及曲霉感染治疗中存在的耐药性两大瓶颈，通过聚焦曲霉细胞壁上的关键组分，筛选能特异性识别曲霉细胞壁组分的亲和力高的广谱单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb），并在体外利用慢病毒转染系统使重组mAb进行稳定表达。方法 通过液氮研磨法提取曲霉（Aspergillus）菌丝体细胞壁碎片，同时制备灭活曲霉孢子，并用细胞壁碎片和灭活孢子免疫小鼠。用免疫原性较高的组分刺激BALB/c小鼠免疫系统表达相应抗体，通过筛选和分析mAb的亲和力和免疫交叉反应，获得广谱性mAb。通过对mAb的序列进行改造，将抗体可变区序列克隆至人源恒定区骨架IgG1-Fc中，构建scFv-Fc融合蛋白表达载体，并利用慢病毒转染系统在HEK293T细胞上进行重组抗体的表达，验证其广谱识别活性。结果 成功筛选到1株高亲和力、且具有广谱活性的mAb。该抗体可同时识别5种曲霉菌丝的细胞壁组分及3种曲霉孢子表面抗原。并成功构建了mAb的慢病毒转染系统的重组抗体，Western blot结果显示，重组抗体成功表达，并根据ELISA结果验证了该重组抗体仍具有广谱活性。结论 该研究筛选到了可识别曲霉细胞壁组分的广谱活性的mAb，该抗体不仅为曲霉感染的早期诊断提供了新的高特异性抗体，而且为开发新的曲霉抗原检测试剂盒奠定基础；同时，通过对抗体的改造，为解决临床耐药性问题提供了候选药物（如双特异性抗体），具有显著的双重转化医学价值。
2026年01期 v.54 20-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 1339K] [下载次数：60 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 侯卫花;王俊瑞;张晓蒙;于航;苏秦;孙利梅;喇嘉琪;李如;申奥;朝鲁门其其格;
目的 利用数据非依赖型质谱采集（data-independent acquisition, DIA）蛋白质组学技术，探讨鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumanii, AB）外膜蛋白33-36(outer membrane protein 33-36, Omp33-36)引起肺上皮细胞损伤的分子机制。方法 基因合成构建重组质粒pET30a-Omp33-36aa20-299，在大肠埃希菌BL21(DE3)-CodonPlus(DE3)菌株中进行诱导表达。表达产物主要以包涵体形式存在，经镍柱亲和层析纯化、尿素梯度透析复性，获得高纯度重组AB Omp33-36。通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8, CCK-8)检测不同浓度Omp33-36处理肺上皮细胞（A549细胞）24 h后的存活率。采用DIA技术对37.50μg/mL Omp33-36处理组与对照组A549细胞进行定量蛋白质组学分析，筛选差异表达蛋白，对差异蛋白进行基因本体（gene ontology, GO）功能注释、京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG）通路富集分析。结果 成功获得纯度为94%的重组Omp33-36。CCK-8实验结果显示，Omp33-36以浓度依赖性方式降低A549细胞存活率（P<0.05）。DIA蛋白质组学技术共鉴定到8 755个蛋白质，筛选出323个差异表达蛋白，其中200个蛋白上调，123个下调。主成分分析（principal component analysis, PCA）显示，对照组与处理组蛋白表达谱存在显著分离。GO功能富集分析、KEGG通路富集分析显示，差异蛋白主要参与信号转导、炎症反应和细胞黏附等生物过程。结论 AB外膜蛋白Omp33-36能有效抑制A549细胞的存活，其作用具有浓度依赖性。Omp33-36显著改变了A549细胞的蛋白质表达谱，涉及的差异蛋白主要调控细胞的信号转导、炎症反应和黏附功能。
2026年01期 v.54 26-35页 [查看摘要][在线阅读][下载 2270K] [下载次数：56 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 刘倩;王珊珊;薛青霖;陈琼;王春娥;李茂光;王斌;
目的 建立检测肺炎球菌多糖中的C多糖（C polysaccharide, C-Ps）含量的速率比浊法。方法 建立一种基于速率比浊法的肺炎球菌多糖中C-Ps含量检测方法，对该检测方法的选择性、残留、标准曲线、准确度和精密度进行系统验证，确保该方法的可靠性和重复性。将经验证的方法初步应用于肺炎球菌多糖C-Ps检测，以评估其在实际样本分析中的可行性和有效性。结果 经系统验证，建立的方法各项验证结果均符合预先设定的检测范围。3批肺炎球菌多糖样品中C-Ps含量的检测结果与核磁共振法的检测结果差异无统计学意义（t=1.367,P=0.230）。用该法对8个肺炎球菌多糖纯化过程中间样品进行检测，结果显示，该纯化工艺能有效且逐步地降低肺炎球菌多糖纯化过程溶液中C-Ps含量，且不会对荚膜多糖含量造成明显损失。结论 建立的肺炎球菌多糖C-Ps速率比浊法具有快捷、准确的优势，能够准确检测各型肺炎球菌多糖中的C-Ps含量，为肺炎球菌疫苗相关研究及生产过程中的质量控制提供数据支持。
2026年01期 v.54 36-41页 [查看摘要][在线阅读][下载 1096K] [下载次数：62 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 胡灵刚;宋兰兰;徐玺丰;贾启波;许馨文;王文博;赵淑敏;唐金舟;秦荣;陈继军;
目的 通过实验设计系统评估CHO细胞培养关键参数pH、降温温度及溶氧水平变化对细胞生长和抗体质量的影响，为细胞培养工艺优化和生产工艺放大提供理论依据。方法 使用Mintab软件进行3因素2水平加中心点的部分因子实验设计，按照实验运行顺序在7 L生物反应器进行不同条件（pH范围7.00～7.40，降温温度范围33～35℃，溶氧水平范围30%～60%）的CHO细胞培养，对培养收获液离心上清进行一步Protein A亲和层析，对表征抗体质量的关键参数进行检测，然后将结果录入到Mintab软件中进行数据分析。结果 数据分析结果显示，降温温度是影响活细胞密度的显著正效应（P=0.007）;pH是影响糖型G0F峰比例的显著负效应（P=0.030）；溶氧水平变化对细胞生长和抗体质量无明显影响。随着培养周期的延长，不同培养条件均发现抗体单体比例降低、聚体比例上升的趋势；抗体电荷异质性均表现出主峰占比降低，碱性峰占比升高的趋势；糖型G0F峰占比也均出现升高趋势。结论 研究结果明确了培养降温温度和pH分别是影响重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体CHO细胞生长和抗体质量的关键因素，为后续培养工艺优化和生产工艺放大提供了数据支撑和理论指导。同时，研究数据支持培养工艺放大中关键参数的正常波动不会对细胞生长和抗体质量产生较大影响的猜想。
2026年01期 v.54 42-48页 [查看摘要][在线阅读][下载 1754K] [下载次数：159 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 谢学超;王笑天;黄仕;陈磊;赵丽丽;李国顺;卢开朗;顾美荣;张改梅;
目的 验证及应用半数细胞感染剂量法（cell culture infective dose 50%, CCID_(50)）检测柯萨奇病毒A组10型（coxsackievirus A10, CVA10）滴度。方法 建立基于CCID_(50)的CVA10病毒滴度检测方法，验证其线性、相对准确度、精密度、耐用性和专属性，并应用已验证CCID_(50)后的方法检测CVA10疫苗病毒培养及灭活工艺样品的病毒滴度。结果 CVA10工作种子批经6个稀释度稀释（每个稀释度独立测定3次），其理论值与实测值的拟合线性回归模型的决定系数（为0.968 2;CVA10工作种子批经3个稀释度稀释（每个稀释度独立测定3次）结果的相对偏倚（relative bias, RB）为-8%～-4%，拟合线性回归斜率（k）为0.962 7;3批CVA10病毒收获液和1批CVA10工作种子批的精密度检测结果的相对标准偏差（relative standard deviation, RSD）为2%～4%;CVA10工作种子批的不同细胞代次、不同细胞密度、不同培养时间检测结果的RSD均在2%～3%范围内。CVA10型疫苗的非目标成分和灭活工艺用液检测结果均无细胞病变效应。结论 CCID_(50)法检测CVA10型病毒滴度的线性、相对准确度、精密度、耐用性及专属性结果良好，可准确检测CVA10疫苗病毒培养及灭活工艺样品的病毒滴度，适用于CVA10疫苗生产质量控制。
2026年01期 v.54 49-55页 [查看摘要][在线阅读][下载 1221K] [下载次数：42 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 胡芹宝;张荟;班建荣;徐海玲;孙渭博;高明;
目的 建立微卫星标记位点的多重PCR(multiplex PCR)及选择BALB/c小鼠遗传质量检测优选方案。方法按照基因组DNA试剂盒说明书完成NIH小鼠和BALB/c小鼠DNA的提取。选取涵盖实验小鼠20条染色体的20对微卫星标记位点，经过在NIH小鼠中遗传多态性研究筛选出PIC<0.250且相互无杂带产生的微卫星标记位点并分组，通过不同的正交实验方案确定各组微卫星标记位点间用量配比完成用于检测BALB/c小鼠遗传质量的多重PCR构建。结果 D1Mit365等20对微卫星标记位点PIC均<0.250且相互无杂带产生，按照目的产物分为A、B、C、D组。正交实验结果显示，40.0μL体系中10.0μmol/L浓度的A组D4Mit140、D11Mit4、D9Mit21、D7Mit281、DXMit16最佳用量配比为2.0、2.0、2.5、2.0、2.5μL;B组D5Mit158、D19Mit3、D15Mit5、D10Mit12、D17Mit11最佳用量配比为1.5、2.5、2.0、2.0、2.0μL;C组D8Mit224、D2Mit15、D3Mit51、D18Mit68、D6Mit15最佳用量配比为1.0、2.5、2.0、1.5、1.5μL;D组D12Mit31、D1Mit365、D14Mit3、D13Mit68、D16Mit223最佳用量配比为1.5、2.5、2.5、1.5、1.5μL。结论 微卫星位点标记的多重PCR成功构建4组扩增体系，为检测BALB/c小鼠遗传质量提供了一种较简便快捷的方案。
2026年01期 v.54 56-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 1866K] [下载次数：97 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 赖潭英;张万方;黄勇;冯燕芳;陈梦茹;何峰;曾祥越;
目的 探究“百日咳再现”背景下的广州市荔湾区百日咳的流行病学特征，为优化百日咳免疫规划策略提供科学的理论依据。方法 采用描述流行病学方法对2024年荔湾区百日咳病例进行时间、地区、人群分布描述，比较含百日咳成分疫苗接种史不同病例的临床特征。结果 2024年荔湾区报告百日咳病例303例，报告发病率24.47/10万。发病呈单峰分布，集中在3—6月。报告病例数居前三的分别为白鹤洞街道40例、石围塘街道35例和桥中街道22例；白鹤洞街道报告发病率最高，为53.73/10万。男女比例为1.12∶1，主要受影响人群为托幼儿童。病例集中在0～<1岁组、5～<6岁组和6～<7岁组，分别占16.50%、14.85%和13.20%；且这3个年龄组的报告发病率也位居前三，依次为464.12/10万、363.40/10万和329.61/10万。临床特征以阵发性咳嗽为主，咳嗽中位时长为18 d;14.19%的病例合并肺炎。全程接种含百日咳成分疫苗可显著降低鸡鸣声（P=0.011）、呕吐（P=0.007）、口唇青紫（P=0.008）、憋气（P=0.002）及窒息（P=0.001）等症状和体征的报告率，并缩短咳嗽时间（P=0.009）。结论 广州市荔湾区2024年百日咳发病率显著高于往年，主要集中于0～<1岁及5～6岁儿童。全程接种含百日咳成分疫苗有助于降低严重临床症状风险，表明2025年起实施的百日咳免疫规划优化策略符合荔湾区当前疫情防控需求。
2026年01期 v.54 68-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 1040K] [下载次数：121 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 陶小娥;谢璇;袁丹;杨晨曦;李鑫;
目的 分析2008—2024年四川省通江县肠道病毒71型（enterovirus 71, EV71）疫苗接种前后手足口病（handfoot-mouth disease,HFMD）流行特征变化，为优化本地区防控策略提供科学依据。方法 通过中国疾病预防控制信息系统和四川省免疫规划信息管理系统，分别收集2008—2024年通江县HFMD疫情资料和2016—2024年EV71疫苗接种数据，采用中断时间序列（interrupted time series, ITS）分析评估疫苗接种前后HFMD发病率变化趋势，并比较病原谱构成、时空分布及人群特征的差异。结果 2008—2024年通江县HFMD年均发病率为56.06/10万。时间分布呈现双峰特征，分别为4—6月和10—12月；地区分布显示，诺江镇年均发病率（161.25/10万）和累计发病数（3 194例）最高；人群分布显示，男性年均发病率高于女性（χ~2=206.554,P<0.001），且以0～<6岁托幼儿童和散居儿童为主。EV71构成比由疫苗接种前的51.43%降至疫苗接种后的9.66%（χ~2=128.469,P<0.001），柯萨奇病毒A组16型（coxsackie virus A16,CVA16）及其他肠道病毒占比则呈上升趋势（CVA16：χ~2=25.383,P<0.001；其他肠道病毒：χ~2=29.269,P<0.001）。2016—2024年EV71疫苗累计接种率为21.21%，呈逐年上升趋势（Z=72.217,P<0.001）。ITS分析显示，全人群及0～<6岁人群接种后发病率年均分别下降3.525/10万（t=-5.167,P<0.001）和34.950/10万（t=-4.983,P<0.001），而≥6岁人群接种后发病率差异无统计学意义（t=-1.825,P=0.091）。结论 EV71疫苗接种显著改变了通江县HFMD流行趋势，逆转了整体发病率上升态势。应采取针对性健康教育、优化疫苗接种策略、加强新型疫苗研发等措施，以进一步巩固防控成效。
2026年01期 v.54 74-82页 [查看摘要][在线阅读][下载 1201K] [下载次数：230 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ]