- 杨柯;王薇;赵强;蔺莉;
目的 探讨脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)对坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis, NEC)小鼠模型肠组织的保护作用及可能的分子机制。方法 选取新生C57BL/6小鼠,采用高渗配方喂食、缺氧和冷刺激的方法,构建NEC小鼠模型,随机分为对照(母乳喂养)组、坏死性小肠结肠炎(NEC+PBS)组和间充质干细胞治疗(NEC+MSC)组,每组10只。UC-MSCs干预后,进行肠道宏观评估及HE染色观察肠组织病理形态学变化,免疫荧光染色检测上皮细胞增殖标志物KI-67和中性粒细胞浸润标记物髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的表达;实时荧光定量PCR检测肠干细胞标记物富含亮氨酸的G蛋白偶联受体5(leucine-rich repeat containing G protein-coupled receptor 5,Lgr5)、炎症指标白介素6(interleukin 6,IL-6)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF-α)的mRNA表达。结果 UC-MSCs经腹腔注射给药后,NEC发生率由50%降低为20%(P<0.05);肠道损伤、小肠宏观学评分、组织病理学评分均低于NEC+PBS组,差异均有统计学意义(P=0.048 0和0.024 3,P均<0.05);肠道上皮细胞增殖标记物KI-67阳性细胞数量及肠道干细胞标记物Lgr5基因表达量较NEC+PBS组均增加,差异均有统计学意义(P=0.012 9、0.030 4,P均<0.05);肠道中性粒细胞浸润指标MPO、炎症指标IL-6和TNF-α较NEC+PBS组均降低,差异均有统计学意义(P=0.020 1、0.000 5和0.001 5,P均<0.05)。结论 UC-MSCs可通过增加肠道上皮细胞增殖、恢复肠道干细胞活性和减少炎症因子来减轻NEC小鼠肠道损伤,具有较好的保护作用。
2024年01期 v.52 9-16页 [查看摘要][在线阅读][下载 2285K] [下载次数:136 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ] - 肖蕾;刘晓巍;张志刚;马树奇;杨俊杰;徐小明;张艳;李红芳;
目的 探究重组猪胰酶(recombinant porcine trypsin, RPT)代替猪源胰酶在冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产中的可能性。方法 选用SPF级地鼠,无菌取肾,用4种不同浓度(0.05、0.10、0.15和0.20 mg/mL)的重组猪胰酶消化原代地鼠肾(primary hamster kidney, PHK)细胞,比较细胞总数、细胞活率以及培养6 d的细胞形态,筛选出最佳重组猪胰酶的工作浓度;对消化液A(含0.30%柠檬酸钠的0.30 mg/mL重组猪胰蛋白酶溶液)和消化液B(含0.30%柠檬酸钠的0.15 mg/mL重组猪胰蛋白酶溶液)消化效果进行对比,选择合适的消化液;对P1代PHK细胞接种狂犬病病毒aG株,确定最佳病毒感染复数(multiplicity of infection, MOI);对不同胰酶消化的细胞接种狂犬病病毒aG株,并比较两者病毒滴度。结果 重组猪胰酶对原代PHK细胞消化的最佳浓度为0.10 mg/mL,消化液A更适用于P1代PHK细胞的消化,细胞培养6 d后形成致密单层,胞体饱满;最佳MOI范围为0.10~0.50,且试验具有高度重复性;镜下观察细胞病变无明显变化,但是重组猪胰酶消化后的细胞比猪源胰酶脱落较少,肉眼可见病毒收获液更澄清;2种胰酶消化制备的P1代PHK细胞病毒滴度差异无统计学意义(P=0.630,P>0.05)。结论 重组猪胰酶可以替代猪源胰酶用于制备冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞),为冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产工艺的改进奠定基础。
2024年01期 v.52 17-22页 [查看摘要][在线阅读][下载 1718K] [下载次数:78 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ] - 尧静;杜娜;李焕芹;尹智平;李玉海;施雄飞;
目的 通过转录组测序(RNA sequencing, RNA-Seq)初步探讨黄芩素对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的作用机制。方法 采用VITEK MS质谱检测仪和Vitek2-Compact药敏分析对菌株T3进行鉴定和药敏试验。通过微量肉汤稀释法测定黄芩素(baicalein, BE)对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌T3的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)。用Illumina NovaSeq 6000转录组测序平台对1/2 MIC黄芩素处理的肺炎克雷伯菌株T3和正常对照组进行RNA-Seq;利用Trimmomatic、Rockhoppe、edgeR和Goatools等生物信息学工具软件处理转录组数据,并分析得到的2组间差异表达基因、基因本体论(gene ontology, GO)注释、GO富集及KEGG代谢通路。结果 菌株T3为对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌,黄芩素对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌T3的MIC为160μg/mL。与对照组相比,黄芩素组有723个差异表达基因,其中上调基因为659个,下调基因为64个;这些差异基因GO注释主要涉及生物学过程14个功能亚类,细胞组分3个功能亚类,分子功能10个功能亚类;GO富集主要发生在生物调控、次级代谢等过程,KEGG代谢通路主要富集在膦酸盐和次膦酸盐、铁载体非核糖体肽生物合成、ABC转运蛋白等代谢通路。结论 黄芩素通过多途径抑制碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌T3生长,其中主要作用靶点是生物调控、次级代谢、膦酸盐和次膦酸盐代谢、铁载体非核糖体肽生物合成及ABC转运蛋白等途径,为进一步研究黄芩素抗CRKP提供依据。
2024年01期 v.52 23-30页 [查看摘要][在线阅读][下载 1687K] [下载次数:373 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ] - 石刚;杨田瑶;任珍芸;李阿妮;王欣茹;郭丽娜;刘文宾;罗树权;李红;叶强;
目的 验证ELISA中使用国产酶标板和国产细胞壁C多糖(cell wall polysaccharides, CWPS)替代现用的进口酶标板(Greiner 655080)和丹麦国家血清研究所(Statens Serum Institut, SSI)的CWPS,用于检测肺炎球菌疫苗免疫人血清中抗荚膜多糖IgG抗体的可行性和适用性。方法 执行PnPS ELISA,以现用SSI的CWPS和Greiner 655080酶标板为对照,分别用国产CWPS和国产酶标板(96BTA),检测相同样品中24个肺炎球菌血清型别的抗荚膜多糖IgG抗体,对检测结果进行系统分析。结果 (1)国产酶标板的适用性验证结果:国产及进口酶标板检测质控血清09CS的24个血清型的荚膜多糖IgG抗体含量完全一致,林氏一致性相关系数(lin's concordance correlation coefficient,r_c)为0.990 3;20份实验室内质控血清的结果为高度一致,r_c为0.958 0;24个血清型的样本最低检测限(lower limit of detection, LLQ)在0.008~0.072μg/mL,进口酶标板为0.010~0.079μg/mL之间。(2) CWPS的适用性验证结果:国产CWPS的生化检测结果和~1H核磁共振波谱图(nuclear magnetic resonance spectroscopy, NMR)与现用SSI的CWPS基本一致;国产和进口CWPS吸收后检测质控血清09CS的24个肺炎球菌血清型特异性荚膜多糖抗体值结果完全一致,r_c为0.999 0;国产及进口CWPS检测所选10对免前及免后血清的检测结果为高度一致,免前血清的r_c为0.953 0,免后血清的r_c为0.972 0。结论 经验证,国产CWPS可替代进口CWPS,国产酶标板可替代进口酶标板,用于肺炎球菌疫苗临床血清特异性抗体含量的检测。
2024年01期 v.52 31-39页 [查看摘要][在线阅读][下载 1436K] [下载次数:222 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ] - 刘英;朱衍志;陆俭;周易;马亚峰;张政;朱俐;张荣;张若晖;
目的 建立A型肉毒神经毒素双抗体夹心ELISA快速定量检测方法,并进行验证及初步应用。方法 通过杂交瘤细胞培养技术制备鼠抗A型肉毒神经毒素单克隆抗体,用ELISA及其他免疫学方法测定抗体效价、亚型及理化性质。优化出最佳试验方案,建立定量检测A型肉毒神经毒素的双抗体夹心ELISA,并对该方法的线性及范围、定量限、准确性、精密度(重复性、中间精密度)、专属性和耐用性进行验证。对本公司相关产品进行测试。结果 制备的A型肉毒神经毒素单克隆抗体纯度为88.15%,效价为1∶102 400,重链亚型为IgG1类,轻链为Kappa类;可与A型肉毒神经毒素的重链特异性结合。建立的A型肉毒神经毒素双抗体夹心ELISA在5.000~80.000 ng/mL范围内线性良好(r>0.99);定量限为2.500 ng/mL;准确度介于80%~115%;CV<15%;该方法与破伤风毒素、B、C、D、E和F型肉毒甘油毒素均无交叉;且A型肉毒神经毒素产品复溶后在2~8℃储存3 d,检测结果不受影响。应用该方法检测本公司开发的新型A型肉毒神经毒素产品,结果符合预期。结论 制备了鼠抗A型肉毒神经毒素单克隆抗体,建立了特异性好且灵敏度较高的A型肉毒神经毒素双抗体夹心ELISA,为A型肉毒神经毒素产品质量控制提供参考价值。
2024年01期 v.52 40-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 1024K] [下载次数:186 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ] - 王玢;邵志伟;杨林鹏;陈卓涛;马素娟;杨千苇;周静;李薇;杨俊杰;周晖国;
目的 评价150型AH100-ATS高压均质机和40型AH100-ATS高压均质机在汉逊酵母细胞破碎中的适用性。方法 用2种AH100-ATS高压均质机分别重复破碎3组汉逊酵母,每组细胞破碎3次,光学显微镜下观察并比较2种高压均质机破碎汉逊酵母细胞前后的形态;SDS-PAGE电泳检测破碎后细胞中目的蛋白的释出;血球计数板计数且计算破碎后的细胞破碎率;Bradford法检测及计算蛋白释出度;计时破碎所需要的时间。结果 光学显微镜下,2种高压均质机破碎汉逊酵母细胞前后的细胞形态均可见明显差别;150型AH100-ATS高压均质机破碎汉逊酵母细胞后释出蛋白的粒径分布体积比高于40型AH100-ATS高压均质机,差异有统计学意义(P<0.05);SDS-PAGE电泳结果显示,150型AH100-ATS高压均质机破碎汉逊酵母后目的蛋白的灰度值高于40型AH100-ATS高压均质机,差异有统计学意义(P<0.05)。150型AH100-ATS高压均质机破碎汉逊酵母细胞3次后,细胞破碎率分别为24.16%、35.63%、48.67%,总细胞破碎率为65.70%;蛋白释出度分别为41.69%、38.29%、15.80%,破碎完成后总蛋白释出度为62.63%;平均使用时间分别为16.7、16.7、19.0 min,破碎完成后总时间为52.3 min。40型AH100-ATS高压均质机破碎破碎汉逊酵母细胞后细胞破碎率分别为16.10%、11.40%、28.78%,总细胞破碎率为58.41%;蛋白释出度分别为24.72%、21.04%、9.57%,破碎完成后总蛋白释出度为55.48%;平均使用时间分别为61.0、59.7、60.7 min,破碎完成后总时间为181.3 min。每次破碎的细胞破碎率、蛋白释出度、所需时间,以及总细胞破碎率、总蛋白释出度、总破碎时间,2种高压均质机差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 150型AH100-ATS破碎汉逊酵母的释出蛋白的粒径分布体积比、目的蛋白、细胞破碎率和蛋白释出度均高于40型AH100-ATS,150型AH100-ATS破碎所需的时间远少于40型AH100-ATS。150型AH100-ATS高压均质机可以用于中试大规模研究中汉逊酵母细胞的破碎,且较40型AH100B-ATS高压均质机破碎需要更短的时间,且具有更好的破碎效果。
2024年01期 v.52 48-54页 [查看摘要][在线阅读][下载 1334K] [下载次数:71 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ] - 张冉;孙刚刚;石献华;
目的 研究预灌封灭菌注射用水作为ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗稀释剂的质量和稳定性,探索疫苗的新型组合包装形式。方法 依据《中华人民共和国药典》2020版(简称《中国药典》)要求,连续生产3批次预灌封灭菌注射用水并检定合格,将其与3批次检定合格的ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗进行组合包装。检测预灌封灭菌注射用水和组合包装中以稀释剂复溶后的脑膜炎球菌多糖疫苗的质量和稳定性。结果 3批次预灌封灭菌注射用水在(40±2)℃、相对湿度(75±5)%条件下放置6个月的加速稳定性试验中,分别按规定于0、1、2、3、6个月取样检测;在(30±2)℃、相对湿度(65±5)%条件下放置48个月的长期稳定性试验中,于0、3、6、9、12、18、24、36、48个月取样检测;各取样节点的检测结果均符合《中国药典》“灭菌注射用水”标准。3批次脑膜炎球菌多糖疫苗在37℃放置6个月的加速稳定性试验中,分别按规定于0、1、2、3、6个月以稀释剂复溶后取样检测;在2~8℃放置48个月的长期稳定性试验中,于0、3、6、9、12、18、24、36、48个月以稀释剂复溶后取样检测;各项检测结果均符合《中国药典》“ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗”标准。结论 预灌封灭菌注射用水作为ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗稀释剂具备适用性,该组合包装形式可为疫苗包装提供新选择。
2024年01期 v.52 55-61页 [查看摘要][在线阅读][下载 1966K] [下载次数:51 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ] - 邵志伟;王玢;周晖国;陈卓涛;杨林鹏;杨千苇;李薇;杨俊杰;
目的 探究国产碟式离心机在规模生产中酵母发酵液菌体分离纯化工艺中的效果,摸索国产碟式离心机对酵母发酵液菌体分离纯化的适用性。方法 检测离心过程中上清液A_(600 nm)值,判断离心工艺分离的效果;检测离心后菌体固含量,评价离心效果是否满足菌体分离的要求;通过计算最终菌体回收率来判断在国产碟式离心机离心过程中菌体可能的损耗;对比国产碟式离心机和大容量离心机离心工艺时间,以菌体固含量和菌体形态检测等指标评价国产碟式离心机在生产规模中的适用性;对比国产碟式离心机离心前后酵母形态的完整性,评价碟式离心机剪切力对酵母分离纯化的影响。结果 国产碟式离心机和大容量离心机离心后酵母发酵液的上清液A_(600 nm)值差异无统计学意义(P=0.053 3,P>0.05);国产碟式离心机离心后菌体固含量均>80%,接近大容量离心机离心后菌体固含量;国产碟式离心机和大容量离心机离心后菌体回收率差异也无统计学意义(P=0.066 4,P>0.05);规模生产中相同体积的酵母发酵液用国产碟式离心机比大容量离心机能够大幅度缩短离心工艺时间,差异有统计学意义(P<0.000 1);国产碟式离心机离心前后酵母形态的完整性结果显示,离心剪切力对酵母几乎没有影响。结论 在酵母发酵液菌体分离中,国产碟式离心机与大容量离心机离心效果接近,但离心纯化时间较短,在规模生产时较适用于本研究中酵母发酵液菌体分离的应用,后续可用于其他规模化生产工艺研究及应用。
2024年01期 v.52 62-66页 [查看摘要][在线阅读][下载 901K] [下载次数:104 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ] - 姜小霞;闫菊;
目的 了解2022年重庆市巴南区3~18岁学生人群的乙肝表面抗体(hepatitis B surface antibody, HBsAb)水平。方法 用非比例分层抽样方法选取中心城区、乡镇两层3~18岁学生人群111 208人,使用免疫层析法检测样本静脉血中的HBsAb,分析其HBsAb阳性数和阳性率。结果 HBsAb阳性数有48 385例,阳性率为43.51%,95%CI为43.20%~43.80%。中心城区阳性数35 753例,阳性率为44.03%;乡镇阳性数12 632例,阳性率为42.10%。不同区域学生阳性率差异有统计学意义(χ~2=33.19,P<0.05)。3~6岁组阳性数5 025例,阳性率为71.19%,年龄组阳性率差异有统计学意义(χ~2=6289.67,P<0.05)。性别比为1.01∶1,阳性率性别差异无统计学意义(χ~2=2.55、P=0.11,P>0.05)。幼儿园阳性数2 318例,阳性率高达77.01%,各类学校阳性率差异有统计学意义(χ~2=5913.42,P<0.01)。中心城区各类学校学生阳性数有35 753例,阳性率为44.03%,高于乡镇各类学校学生。结论 巴南区3~18岁学生人群HBsAb阳性率总体不高,中心城区人群阳性率高于乡镇,4类学校学生阳性率随年龄呈现降低趋势。
2024年01期 v.52 67-71页 [查看摘要][在线阅读][下载 797K] [下载次数:123 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
- 韦欢欢;朱俊萍;
手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)是一种可由多种肠道病毒引起的以儿童急性感染为主的全球性传染病。近期,柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)引起的典型及非典型HFMD在多个国家及地区发病率明显上升且临床表现多样。而CVA6的分子进化、人群群体免疫屏障的建立等均可影响HFMD的暴发流行及病原谱的变迁。现就CVA6的流行、分子进化与重组、氨基酸变异、结构解析及血清流行病学研究作一概述,旨在为HFMD的防控提供思路。
2024年01期 v.52 72-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 1083K] [下载次数:183 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ] - 张勇侠;周觉非;
呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是全球≤5岁儿童严重下呼吸道感染的主要病原之一,在免疫功能低下人群(尤其是≥65岁老年人)中反复感染往往会导致严重疾病甚至死亡。因此,研发安全、高效的预防性药物和疫苗是预防RSV感染的重要手段。目前,大多数RSV候选疫苗和抗体的主要靶标是RSV表面的保护性抗原F蛋白的融合前构象F蛋白,而RSV G蛋白也是RSV表面的主要保护性抗原之一。G蛋白与细胞表面受体结合后促进RSV感染。在RSV感染过程中,G蛋白通过影响宿主的免疫反应引起RSV相关疾病的发生。其中,在RSV的免疫反应和致病机制中,G蛋白的CX3C趋化因子基序起重要作用。G蛋白在病毒感染过程中的机制及其特征表明,G蛋白可能是疫苗和抗病毒药物研发的重要靶点并具有巨大的研究价值。现就RSV G蛋白相关的细胞表面受体、G蛋白对RSV感染宿主的免疫反应的影响及动物研究中G蛋白致病机制的特征作一概述。
2024年01期 v.52 79-83页 [查看摘要][在线阅读][下载 832K] [下载次数:254 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ] - 李华;胡丽娜;焦磊;
γ-聚谷氨酸(poly-γ-glutamic acid,γ-PGA)是一种天然的阴离子聚合物,由γ-酰胺键连接D-或/和L-谷氨酸的α-氨基与相邻谷氨酸的γ-羧基的重复结构组成。γ-PGA具有极强的水溶性、可生物降解性、生物相容性、安全无毒、可食用和环境友好的生物学特性,被广泛应用于农业、环境保护、医药、食品、工业和化妆品等领域,是一种较为理想的新型生物材料,拥有巨大的应用前景及经济价值,近年来引起越来越多的国内外研究人员的关注。现就γ-PGA的结构、理化性质、产生菌株、相关基因、生物合成以及应用等方面作一概述。
2024年01期 v.52 84-90页 [查看摘要][在线阅读][下载 1252K] [下载次数:417 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ] - 刘欢;侯凯;王崇刚;
鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)是一种革兰阴性菌(Gram negative bacterium),是引发院内感染的主要致病菌之一。AB耐药机制复杂,其中AdeABC外排泵是AB的主要耐药机制之一。双组份系统(two component system, TCS)是AB的信号转导系统,TCS AdeRS和TCS BaeSR可以调控AdeABC外排泵表达,有很大潜力成为AB的抗菌药物靶点。现就TCS对AdeABC外排泵的调控机制及TCS抑制剂的研究进展作一概述。
2024年01期 v.52 91-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 855K] [下载次数:128 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ] - 牛欣欣;黄明元;曾今诚;
1909年麦角硫因(ergothioneine, EGT)首次被分离,是一种天然水性含硫氨基酸,具有强抗氧化能力,主要由微生物合成。作为一种极性小分子,麦角硫因在肠道有机阳离子转运体1(organic cation transporter 1,OCTN1)的帮助下穿过细胞膜,通过血液运输到肠道、肝脏和肾脏等全身器官,在预防和治疗各种疾病(如心血管疾病、肾脏疾病、糖尿病等)中发挥着重要作用。现就EGT的微生物合成、提取方法和检测手段,及其抗氧化作用在免疫性疾病中的研究进展作一概述。
2024年01期 v.52 97-102页 [查看摘要][在线阅读][下载 959K] [下载次数:232 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ] 下载本期数据