- 孙一好;杜亚鑫;张仲锴;魏真妮;申硕;
目的 构建埃可病毒11(echovirus 11,Echo11)感染性克隆，进一步探究Echo11不同基因型毒株的生长能力差异。方法 通过PCR分段扩增2株Echo11毒株的全长序列，胶回收后的PCR产物经同源重组连接到线性化的pBR322载体。通过PCR和测序对感染性克隆进行鉴定，并将鉴定正确的感染性克隆转染BSR-T7/5细胞进行病毒拯救。通过观察细胞病变、间接免疫荧光试验对拯救的病毒进行鉴定，并评价了拯救毒株与亲本毒株生长能力的一致性。最后通过测定一步生长曲线评价了2株拯救毒株在RD和Vero细胞上的生长能力差异。结果 成功完成了Echo11感染性克隆的构建，细胞病变和间接免疫荧光结果显示拯救毒株能在细胞上生长，且拯救毒株与亲本毒株的体外增殖能力基本一致。拯救毒株r6362和r5151在RD细胞上具有相似的生长能力，均在8 h时达到峰值且无明显差异，分别为9.75和9.58 lgTCID_(50)/mL;而在Vero细胞上表现出不同的生长能力，r6362在24 h时到达峰值8.24 lgTCID_(50)/mL,r5151在48 h时达到峰值7.20 lgTCID_(50)/mL。结论 建立了Echo11的反向遗传学系统，证明了Echo11毒株的体外增殖能力与分离株的基因型相关，为后续Echo11生物学特性研究、致病机理研究、疫苗研发和药物开发等提供了有效工具。
2025年03期 v.53 1-9页 [查看摘要][在线阅读][下载 2326K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 杨田瑶;李献林;薛青霖;韩一正;王欣茹;刘方蕾;罗树权;
目的 建立并验证检测四价脑膜炎奈瑟菌(简称脑膜炎球菌)多糖结合疫苗(meningococcal conjugate vaccine)免疫小鼠血清中抗A、C、W135、Y群多糖IgG抗体含量的间接ELISA方法。方法 通过对抗原包被浓度、酶标板型号、封闭等实验条件的选择，建立小鼠血清中的四价脑膜炎球菌荚膜多糖IgG抗体的间接ELISA检测方法；并对该方法的特异性、精密度及线性进行验证。结果 各群脑膜炎球菌荚膜多糖适宜的包被浓度分别为：A群2.00μg/mL,C群2.50μg/mL,W135群10.00μg/mL,Y群10.00μg/mL;确定酶标板型号为Costar92529,封闭条件为加入1.00%牛血清白蛋白的1×TBS稀释液。标定单价标准血清ELISA单位为A群2 000.00 EU/mL、C群2 000.00 EU/mL、W135群1 000.00 EU/mL、Y群2 000.00 EU/mL、破伤风类毒素5 000.00 EU/mL。采用抑制ELISA的方法验证方法的特异性，比较正常组和抑制组的数据，确定各群抗原对其他群别的抗体检测不产生干扰；用四参数方程拟合曲线计算样品的ELISA单位(EU/mL),将稀释倍数和样品中的ELISA单位取以2为底的对数建立的曲线线性良好(R~2>0.99);精密度CV≤20.00%;A、C、W135、Y群多糖IgG抗体含量最低检测值分别为0.03、0.03、0.03和0.02 EU/mL。结论 建立的间接ELISA方法在实验室条件下，特异性较强、精密性良好和灵敏度较高，适用于定量检测小鼠血清中抗四价脑膜炎球菌荚膜多糖IgG抗体。
2025年03期 v.53 10-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 1158K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 唐金舟;宋兰兰;徐玺丰;杨王红;王凯;胡灵刚;秦荣;赵晓瑞;白君;安晨;
目的 研究经过多次传代后，重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体CHO工程细胞株的稳定性。方法 从工作细胞库抽取1支细胞进行复苏。每3 d将细胞按照0.8×10~6个/mL的密度进行传代。挑选第3、7和13代(以下用P3、P7和P13表示)的细胞进行传代稳定性研究。将P3、P7和P13的细胞分别接种至标号为1～3的摇瓶中进行流加培养，每个代次设3个重复。初始培养体积设定为100 mL,初始培养密度设定为0.8×10~6个/mL。所有摇瓶按相同补料添加策略进行补料。流加培养过程中，每隔24 h取样，分别检测活细胞密度、活率、葡萄糖浓度、乳酸浓度、铵根离子浓度和抗体蛋白浓度，直至培养结束。绘制各代次细胞生长曲线，计算细胞比生长速率(μ)、葡萄糖比消耗率(Q_(Gluc))、乳酸和铵根离子的比生成率(Q_(Lac)和Q_(NH4+))。比较不同代次细胞生长曲线、比生长速率及生化指标。采用实时荧光定量反转录PCR检测不同代次细胞的抗体基因相对表达量。对P13细胞的目的片段进行测序以检测抗体基因序列稳定性。结果 流加培养生长曲线结果显示：P3、P7和P13最高活细胞密度分别为12.9×10~6、13.0×10~6和14.5×10~6个/mL;细胞活率在10 d时均>85%;P3、P7和P13收获液中抗体蛋白质量浓度分别为4.962、4.248和4.104 g/L,差异无统计学意义(F=2.338、P=0.178,P>0.05)。各代次细胞的μ、Q_(Gluc)、Q_(Lac)及Q_(NH4+)差异均无统计学意义(P均>0.05)。细胞抗体基因相对表达量在各代次之间的差异无统计学意义(F=4.614、P=0.061,P>0.05)。抗体基因重链和轻链测序结果与目的序列一致。结论 表达重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的CHO工程细胞株在传代至P13时，稳定性良好，可满足后续的研究和生产需求。
2025年03期 v.53 28-33页 [查看摘要][在线阅读][下载 1385K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李航;刘洪涛;张树杰;李萌;魏波;王梦涵;周慧;蔡岩;
目的 比较水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus, VZV) Oka-7S-2.2株和Oka-7S-3.1株在2BS细胞中的滴度、蛋白、基因等结果，筛选出1株病毒用于猴体神经毒力试验，为后续的疫苗株筛选和鉴定提供基础。方法 分别将Oka-7S-2.2株和Oka-7S-3.1株病毒在2BS细胞连续传代至P41代，用蚀斑法比较P8代至P41代病毒滴度差异；Western blot检测P8、P11、P15、P16、P21、P26、P31、P36、P41代gE和ORF7蛋白表达；用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)扩增Oka-7S株以及P8、P11、P15、P16、P21、P26、P31、P36、P41代的Oka-7S-2.2株和Oka-7S-3.1株病毒的全基因序列片段，比较碱基位点、氨基酸序列差异。通过猴体神经毒力试验，比较P12、P21、P31、P41代Oka-7S-2.2株病毒与vOka株病毒的神经毒力。结果 Oka-7S-2.2株病毒从P8代传代至P41代，病毒滴度在5.97～6.70 lgPFU/mL之间；Oka-7S-3.1株病毒从P8代传代至P41代，病毒滴度在5.83～6.80 lgPFU/mL之间，且2种毒株均稳定表达gE蛋白而不表达ORF7蛋白。Oka-7S-2.2株病毒在P26代开始发生碱基突变，传代至P41代，共发生2处突变；Oka-7S-3.1株病毒在P21代开始发生碱基突变，传代至P41代共发生6处突变。与Oka-7S株病毒基因相比，Oka-7S-2.2株P8代病毒在54048位点发生突变，在ORF29编码区赖氨酸变成组氨酸；而Oka-7S-3.1株P8代病毒与Oka-7S株病毒基因序列一致。猴体神经毒力试验结果显示，试验组与阳性对照组恒河猴脑部组织病理检查均可见轻微或轻度的少突胶质细胞坏死或变性。结论 在2BS细胞上从P8代传代至P41代，Oka-7S-2.2株病毒适应性好，具有良好的传代稳定性，且无神经毒力，为后续的疫苗研发奠定基础。
2025年03期 v.53 34-40页 [查看摘要][在线阅读][下载 1486K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张宏丽;王艺博;夏强;常万柳;李磊;夏青娟;李春雷;丛丹;张民;徐艳玲;
目的 探究重组胰蛋白酶替代猪源胰蛋白酶在冻干甲型肝炎减毒活疫苗制备中的可行性。方法 复苏2BS细胞，分别用0.010%、0.015%、0.020%、0.025%的重组胰酶和0.250%的猪源胰酶消化并传代，比较消化时间、细胞密度和细胞活率，确定重组胰酶最佳工作浓度；分别使用重组胰酶和猪源胰酶消化后传代，比较细胞密度及形态，绘制细胞生长曲线；将长成单层的2BS细胞分别经重组胰酶和猪源胰酶消化后传代，进一步扩大培养细胞，连续传代2次，根据细胞密度、细胞活率进行比较；使用重组胰酶消化连续传代2BS细胞至66代，分别取P40代、P50代、P60代和P66代进行短串联重复序列(short tandem repeats, STR)分析，检测使用重组胰酶后2BS细胞的遗传稳定性；对不同胰酶消化传代的2BS细胞感染甲型肝炎病毒，制备病毒收获物，并比较两者病毒滴度；分别使用猪源胰酶和重组胰酶生产成品，并进行胰酶残留量检测，比较两者的残留量结果。结果 使用0.015%、0.020%、0.025%重组胰酶的消化时间、消化后传代的细胞密度和活率与0.250%猪源胰酶差异无统计学意义(P均>0.05);0.010%重组胰酶的消化时间、消化后传代的细胞密度和活率与0.250%猪源胰酶差异均有统计学意义(P均<0.05),确定重组胰酶的工作浓度为0.015%;使用重组胰蛋白酶和猪源胰酶消化后传代的细胞均生长良好，显微镜下均为典型的成纤维细胞，细胞密度差异无统计学意义(P=0.795,P>0.05);细胞扩大培养连续传代2次，细胞密度、细胞活率差异均无统计学意义(P均>0.05); STR分析结果与ExPASy数据库中2BS细胞的19个STR位点和Amelogenin位点的数据匹配率为100%;采用重组胰酶和猪源胰酶制备收获物的病毒滴度差异无统计学意义(P=0.184,P>0.05);成品胰酶残留量差异均无统计学意义(P=0.191、0.086,P均>0.05)。结论 重组胰蛋白酶可替代猪源胰酶用于冻干甲型肝炎减毒活疫苗的制备。
2025年03期 v.53 41-46页 [查看摘要][在线阅读][下载 1060K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 秦海艳;张继文;马素娟;张钧淇;李晨;张志豪;杨俊杰;
目的 建立同时测定重组诺如病毒疫苗原液中工艺相关杂质聚乙二醇6000(polyethylene glycol 6000,PEG6000)和吐温80(Tween 80)残留量的高效液相色谱-蒸发光散射检测器(high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector, HPLC-ELSD)分析方法，并对方法进行验证及初步应用。方法 通过筛选HPLC的进样量及优化ELSD的蒸发和雾化温度，建立同时测定PEG6000和Tween 80残留量的检测方法。对方法的专属性、线性和范围、定量限、准确度和精密度进行验证。用建立的方法对3批GI.1型重组诺如病毒疫苗原液和3批GII.4型重组诺如病毒疫苗原液中PEG6000和Tween 80的残留量进行检测。结果 采用NanoChrom Ghost-Remover色谱柱降低基线噪音，采用ChromCore SAA色谱柱分离目标组分，柱温为25℃,进样量为100μL,ELSD蒸发温度为75℃,雾化温度为65℃,气体流速为1.60 SLM,以0.1%乙酸水溶液和0.1%乙酸异丙醇溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为1.2 mL/min,检测时间为20 min,后运行时间为5 min。PEG6000目标峰于6.7 min左右出现，Tween 80目标峰于10.9 min左右出现，且两者相互无干扰。PEG6000和Tween 80浓度在5.000～50.000μg/mL范围内，两者浓度的对数分别与其峰面积的对数均呈良好的线性关系，R~2均>0.990;PEG6000和Tween 80的定量限均为3.125μg/mL;高、中、低浓度PEG6000和Tween 80对照品的回收率均在90%～115%之间；精密度验证显示，PEG6000和Tween 80的保留时间、峰高和峰面积的RSD均<5%。3批GI.1型重组诺如病毒疫苗原液和3批GII.4型重组诺如病毒疫苗原液中PEG6000和Tween 80的残留量均低于定量限。结论 建立的方法专属性和线性良好，准确度和精密度高，可以用于重组诺如病毒疫苗原液中PEG6000和Tween 80残留量的检测。
2025年03期 v.53 47-54页 [查看摘要][在线阅读][下载 1194K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张艳丽;吴元元;姬鼎悝;张琥珀;罗丹;何文芳;陈勇;
目的 筛选表达Exendin-4-Fc融合蛋白的CHO细胞国产无血清培养基，以提高融合蛋白表达量。方法 考察不同国产基础培养基、补料培养基对重组CHO细胞的活细胞密度(viable cell density, VCD)和融合蛋白表达量的影响，筛选出最佳培养基组合，并在3.0 L反应器进行发酵培养。结果 CHO细胞在BM2和BM3两种基础培养基里最大活细胞密度(Peak VCD)值高、对数生长期细胞比生长速率快，且活细胞密度对时间的积分(integral of viable cell concentration over time, IVCC)值高；250 mL摇瓶fed-batch补料培养基筛选模式下，SF3组较对照组最具优势，Peak VCD为24.18×10~6个/mL,IVCC值为257.99×10~9个·d/L,收获液上清蛋白表达量为1 408 mg/L。该培养基组合和培养策略经3.0 L反应器放大测试，细胞生长和活率维持与摇瓶相当，代谢参数可接受，融合蛋白表达量可比。结论 SF3组培养基为最优培养基组合，提高了重组CHO细胞融合蛋白表达量。
2025年03期 v.53 55-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 1296K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 尚伟;孙振威;代稳;魏晓杰;孙庆国;陈北方;
目的 比较不同耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的全基因组序列，研究分析其生物信息学差异特征，为临床研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)分子流行病学和致病机制提供材料。方法 应用高通量测序技术对临床分离的2株MRSA进行全基因组测序，并利用生物信息学工具对菌株序列进行耐药基因、多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)、葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal protein A,SpA)基因分型、SCCmec(Staphylococcus cassette chromosome mec)分型和毒力因子等分子生物学特征分析。结果 菌株JP01和JP02染色体基因组大小、结构和功能相似；JP01为ST59-MRSA-SCCmec Iva-t437,主要耐药基因有ant6(Ia)、aph3'Ⅲ、mecA、blaZ、ermB、tetK,含9个毒力基因(aur、scn、hlgA、hlgB、hlgC、seb、sek、seq、sak);JP02为ST338-MRSA-SCCmec Vb-t437,主要耐药基因有ant6(Ia)、aph3'Ⅲ、mecA、blaZ、ermB、tetK、cat(pC233),含10个毒力基因(aur、scn、hlgA、hlgB、hlgC、seb、sek、seq、lukS-PV、lukF-PV);COG功能注释显示与生命基本功能的相关基因占优势。结论 获得了2株MRSA的全基因组序列数据和分子结构特征，JP02多携带氯霉素乙酰转移酶耐药基因cat(pC233)和潘顿-瓦伦丁杀白细胞素基因lukS-PV、lukF-PV,耐药性和致病力较强，为金黄色葡萄球菌的分子流行病学和致病性机制研究提供参考依据。
2025年03期 v.53 61-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 1682K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 路琼;张杰;唐茂玲;黄维金;聂建辉;
目的 对中国2021—2022年双价人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)疫苗(大肠埃希菌)批签发质量控制中的体外效力进行趋势分析，为同类疫苗评价提供参考。方法 根据国内企业2021年和2022年双价HPV疫苗的体外效力数据建立警戒限与行动限，绘制趋势分析图并进行趋势分析。同时，将中国食品药品检定研究院(简称中检院)批签发检测结果与企业结果进行Bland-Altman一致性分析。结果 2021年和2022年体外效力趋势分析显示，企业检测结果显示HPV16和HPV18体外效力的平均值分别为1.0和1.4,没有超趋势(out of trend, OOT)情况，连续2年趋势保持稳定。企业和中检院检测的2个型别体外效力的年度平均值差异不大(≤0.1),各自检测数据的CV均≤10%,同时对中检院与企业检测结果进行Bland-Altman一致性检验分析，结果显示两者一致性良好。结论 2021年和2022年双价HPV疫苗批签发体外效力趋势分析反映该制品生产工艺稳定，批间一致性较好，企业检验方法较可靠，为上市疫苗的质量控制提供保证。
2025年03期 v.53 68-72页 [查看摘要][在线阅读][下载 1379K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 焦艳会;吕亚可;刘怡;胡伟军;
目的 了解陕西省高校女大学生的人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)疫苗接种现状及影响因素，为提高高校女大学生HPV疫苗接种率提供参考。方法 调查对象为陕西省3所高校1 900名女大学生，采用单变量差异性分析方法描述不同疫苗接种状态人群的组间差异，并采用单因素和多因素logistic回归筛选可能对HPV疫苗接种有影响的因素。结果 陕西省高校女大学生对HPV及其疫苗相关知识的总体认知合格率为58.13%。医学生HPV及其疫苗总体认知合格率高于非医学生，差异具有统计学意义(χ~2=19.236,P<0.001)。调查对象的HPV疫苗接种意愿为88.28%,而实际接种率仅为9.24%。疫苗接种率的高低受多种因素影响，包括个体的年级、父母双方的文化程度、家人或朋友的告知等。结论 陕西省高校女大学生HPV疫苗接种率低而接种意愿高。应加强高校女大学生HPV相关知识宣教及疫苗接种工作。
2025年03期 v.53 73-80页 [查看摘要][在线阅读][下载 808K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 庄贤君;王崇刚;
鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)是一种革兰阴性菌(Gram-negative bacterium),已成为院内感染最常见的机会性致病菌。随着抗生素的广泛使用，其多重耐药形势日趋严峻，迫切需要寻找新的防治手段。外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMV)是AB释放的球形纳米颗粒，具有获取营养素、诱导抗生素耐药、影响生物膜形成、递送毒力因子、调节免疫反应、去除有害物质及参与细胞间通讯等多种生物功能。近年来，OMV也衍生了多种潜在用途，如作为疫苗、佐剂、抗原递送平台、抗生素递送载体、抗菌剂等，有望用于治疗AB引起的感染。现就AB OMV的生物功能及抗菌应用作一概述。
2025年03期 v.53 81-86页 [查看摘要][在线阅读][下载 822K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 孙小芳;曾今诚;王少波;
糖尿病(diabetes mellitus, DM)的患病率持续上升，使得糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)成为终末期肾脏病(end-stage renal disease, ESRD)的主要病因之一。目前，早期诊断和治疗是延缓ESRD进展的关键研究方向。间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)具有自我更新和多向分化的特性，在组织修复中扮演着重要角色。其分泌的外泌体携带的生物活性分子，通过细胞间的信息交流，参与多种疾病发病机制的调节。线粒体作为能量供应的主要场所，在DKD的发生和发展中扮演重要角色。现主要围绕MSCs外泌体在DKD线粒体功能调节中的作用作一概述，为延缓DKD进入终末期肾脏病提供新的治疗靶点。
2025年03期 v.53 87-91页 [查看摘要][在线阅读][下载 795K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 潘玉卿;李娅;
免疫系统在抵抗外来病原体和防止自身组织受损之间保持动态平衡，而免疫调控正是为实现这种平衡的关键。近年来，B细胞慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤6成员B(B cell CLL/lymphoma 6 member B,BCL6B)与免疫细胞的发育、分化、成熟关系密切，尤其是对淋巴细胞功能具有显著的调控作用。作为一个新兴研究领域，BCL6B基因在免疫系统的发育和功能中发挥着重要作用，具有潜在的临床应用价值。现综述了BCL6B基因的结构与功能，阐述其在免疫系统调控中的作用。
2025年03期 v.53 92-97页 [查看摘要][在线阅读][下载 870K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张涵悠;霍莉莉;
肠道微生态(gut microbiota)作为人体最大、最复杂的微生态系统，在儿童呼吸道病毒感染过程中发挥重要作用，特殊的儿童肠道菌群又与宿主免疫反应的特异性表现出较强的相关性。当前针对儿童呼吸道病毒的疫苗及特效治疗药物有限，因而研究肠道微生物及其代谢产物与儿童免疫系统动态平衡之间的互作机制具有较高的临床价值。近年来出现了多种构建儿童免疫系统的新方法，包括益生菌、益生元等肠道微生态疗法，以及中医药调理方法。这些方法为预防和治疗儿童呼吸道病毒感染提供了新思路。
2025年03期 v.53 98-104页 [查看摘要][在线阅读][下载 1265K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 刘宗绪;石西南;
近年来，肿瘤免疫治疗通过激活免疫反应，呈现良好的临床抗肿瘤作用。然而，由于微环境免疫抑制作用等原因，肿瘤患者出现低响应率。肿瘤微环境(tumor microenvironment, TME)中各种成分之间存在不同的相互作用方式，促进免疫反应或抑制免疫反应，从而影响肿瘤的发生、发展，甚至影响肿瘤免疫治疗疗效或其他治疗方式效果。当癌细胞侵袭时，机体免疫系统及时启动免疫反应，发挥清除、杀灭肿瘤的作用。然而，TME免疫反应出现抑制状态时，将导致肿瘤细胞恶性增殖。现针对TME中不同成分间的相互作用方式影响不同免疫反应进行探讨，以期为肿瘤临床治疗提供新的思路和策略。
2025年03期 v.53 105-112页 [查看摘要][在线阅读][下载 1516K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] 下载本期数据