- 欧阳蕾;吴佩璇;师江龙;潘勇兵;
目的 制备抗猴痘病毒(monkeypox virus, MPXV)A35R蛋白单克隆抗体并建立其双抗体夹心ELISA检测方法，同时对方法进行验证。方法 原核表达MPXV A35R蛋白并免疫BALB/c小鼠，经杂交瘤技术制备抗A35R蛋白单克隆抗体，对单克隆抗体的特异性、结合活性进行鉴定；建立双抗体夹心ELISA检测方法，对该方法的线性范围、检测限、专属性、准确性、精密度进行验证。结果 制备了7株抗MPXV A35R单克隆抗体。Western blot鉴定结果显示，7株单克隆抗体均与MPXV A35R蛋白及灭活MPXV发生特异性反应；7株单克隆抗体结合活性为11.35～27.73 ng/mL;抗体经配对筛选后，确定以7G5和2F5为最佳配对抗体，用于建立双抗体夹心ELISA方法。该方法对灭活MPXV抗原最低检测限为1.250×10~4 TCID_(50)/mL,对MPXV A35R蛋白最低检测限为1.95 ng/mL,线性范围为3.91～125.00 ng/mL,线性回归方程为y=1.732 0x-0.920 8,R~2=0.984 3;该方法专属性较强且不与其他病毒及蛋白发生交叉反应；准确性验证结果显示，病毒抗原回收率为96.94%～110.04%;批间CV为0.26%～8.13%,批内CV为2.10%～5.48%。结论 成功制备了抗MPXV A35R蛋白单克隆抗体，建立了双抗体夹心ELISA检测方法。验证结果显示，该方法具有较高的灵敏度、准确度、重复性及专属性，可用于以A35R蛋白为基础的猴痘亚单位疫苗的生产质量控制。
2024年04期 v.52 1-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 1272K] [下载次数：846 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 秦海艳;谢忆;张巧玲;马素娟;李晨;杨林鹏;付艳丽;李奇蒙;杨俊杰;
目的 通过在人胚肾-293T(human embryo kidney-293T,HEK-293T)细胞中过表达岩藻糖转移酶2(fucosyltransferases 2,FUT2)基因，进而催化诺如病毒受体人类组织血型抗原(histo-blood group antigen, HBGA)的形成，构建介导诺如病毒和受体发生相互作用的细胞系。方法 构建FUT2慢病毒质粒，采用Lipofectamine 2000将FUT2慢病毒质粒及pMD.2G和psPAX2包装质粒共转染HEK-293T细胞，收获慢病毒颗粒。慢病毒颗粒感染对数生长期的HEK-293T细胞，嘌呤霉素加压筛选获得HEK-293T/FUT2细胞系。PCR鉴定FUT2基因是否整合到基因组中，RT-qPCR检测HEK-293T/FUT2细胞FUT2 mRNA转录水平，流式细胞术分析HEK-293T/FUT2细胞HBGAs的表达，间接免疫荧光法分析HEK-293T/FUT2细胞与诺如病毒病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)的结合活性。结果 成功构建了序列正确的慢病毒质粒PLVX-IRES-Puro-FUT2,并获得了慢病毒颗粒。慢病毒颗粒感染HEK-293T细胞后，通过嘌呤霉素加压筛选获得了HEK-293T/FUT2细胞系，PCR验证显示，FUT2基因成功整合到HEK-293T细胞基因组中。HEK-293T/FUT2细胞FUT2 mRNA水平提高了330倍。99.9%的HEK-293T/FUT2细胞表达H2型人类组织血型抗原。GI.1重组诺如病毒VLP可以与HEK-293T/FUT2细胞产生很好的结合反应，EC_(50)为2.007μg/mL。结论 建立了H2型人类组织血型抗原稳定高表达的HEK-293T细胞系，并基于该细胞系初步建立了GI.1型重组诺如病毒VLP结合活性评价方法。
2024年04期 v.52 9-15页 [查看摘要][在线阅读][下载 1631K] [下载次数：278 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 唐悦;王婉;侯风萍;寇桂英;陈玥如;郭岚;李奇蒙;傅生芳;李雄雄;
目的 建立呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)融合前F蛋白(prefusion F protein, pre-F)三聚体定量检测方法，并对其进行方法学验证和初步应用。方法 选取RSV pre-F三聚体特异性抗体AM14作为捕获抗体，辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记的RSV pre-F特异性抗体D25作为检测抗体，通过方阵滴定法确定捕获抗体和检测抗体的最佳浓度，对封闭液进行优化，建立双抗体夹心ELISA。分别对该方法的专属性、准确度、精密度和耐用性进行验证，并应用于RSV亚单位疫苗工艺开发中pre-F三聚体的定量检测。结果 该方法确定的捕获抗体AM14包被浓度为1.25μg/mL,检测抗体D25浓度为0.50μg/mL,封闭液为1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)。方法验证结果显示，线性范围为1.50～24.00 ng/mL,标准曲线R~2>0.99,最低检测限可达1.33 ng/mL;该方法专属性良好，仅与RSV pre-F三聚体反应；准确度和精密度验证结果显示回收率为87.41%～117.03%,变异系数(coefficient of variation,CV)为5.47%～14.07%;检测抗体孵育时间及显色时间在一定范围内波动时，回收率在87.65%～106.45%,证明该方法耐用性优良；该方法可应用于RSV pre-F发酵和纯化等样品的检测。结论 成功建立并验证RSV pre-F三聚体定量检测方法，该方法专属性强，准确度、精密度、耐用性均优良，可应用于RSV疫苗工艺开发中pre-F三聚体的定量检测，无需Octet或者Biacore等精密仪器，具有操作简单、定量准确、成本低、便于推广应用等优点。
2024年04期 v.52 16-22页 [查看摘要][在线阅读][下载 985K] [下载次数：268 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 陈丝丝;夏芙蓉;於洋;何鹏;王玲;张娜;赵芳圆;范天一;李世慧;
目的 采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)方法检测百日咳毒素(pertussis toxin, PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin, FHA)和百日咳黏附素(pertactin, PRN)精制抗原纯度，并进行验证。方法 对样品进行SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝染色后，使用凝胶成像系统拍照并用Image Lab软件进行分析，获得样品各蛋白条带的光密度值。对建立的方法进行系统适用性、线性、准确度、重复性、中间精密度、灵敏度和耐用性验证。结果 对应2套分子量标准蛋白，PT、FHA和PRN精制抗原分别在10.00～50.00μg/mL的低质量浓度范围和50.00～600.00μg/mL的高质量浓度范围内，蛋白浓度和对应条带光密度值之间具有良好的线性关系，相关系数(coefficient of correlation,r)≥0.99。3种精制抗原杂质水平准确度和重复性回收率均在80%～120%,且重复性验证相对标准差(relative standard deviation,RSD)≤10%;抗原水平准确度和重复性回收率均在90%～110%,重复性验证RSD≤10%;灵敏度12.50μg/mL的回收率均在80%～120%,RSD≤10%;中间精密度验证RSD≤10%。结论 建立的测定PT、FHA和PRN精制抗原纯度的SDS-PAGE法，其系统适用性、准确度、重复性、中间精密度和灵敏度均良好，可用于以上精制抗原的纯度检测。
2024年04期 v.52 23-29页 [查看摘要][在线阅读][下载 907K] [下载次数：759 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 杨立宏;岳广智;徐宏山;李玉华;叶强;刘欣玉;
目的 验证运用有机溶剂/去污剂(S/D)处理法和膜过滤法对人凝血因子Ⅸ中辛德毕斯病毒(Sindbis virus)和猪细小病毒(porcine parvovirus, PPV)的灭活/去除效果。方法 采用S/D处理法灭活人凝血因子Ⅸ中添加的Sindbis virus,噬斑滴定法检测灭活前后的病毒滴度；膜过滤法去除添加的PPV,细胞病变法检测去除前后的病毒滴度。结果 经S/D处理法灭活后，3批人凝血因子Ⅸ中Sindbis virus降低量分别为>4.62 lgPFU/mL、>4.64 lgPFU/mL、>4.50 lgPFU/mL。经Planova 15N膜过滤后，3批人凝血因子Ⅸ中PPV降低量分别为≥4.50 lgTCID_(50)/0.1 mL、≥4.56 lgTCID_(50)/0.1 mL、≥4.38 lgTCID_(50)/0.1 mL。结论 通过对指示病毒的验证效果评估，证明运用S/D法和膜过滤法对人凝血因子Ⅸ中的Sindbis virus和PPV均有较好的灭活/去除效果。
2024年04期 v.52 30-33页 [查看摘要][在线阅读][下载 862K] [下载次数：127 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 周志军;陈丽梅;岳胜兰;宋池忠;张胜平;汪菲菲;李娟;李策生;胡勇;张金;
目的 通过筛选合格献浆员、确定较高效价水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus, VZV)-IgG的维持时间并追溯合格献浆员的在库血浆，建立快速、高效的合格原料血浆采集方案，用于静脉注射水痘带状疱疹人免疫球蛋白[human varicella zoster immune globulin for intravenous administration, VZIG(IV)]的制备。方法 随机抽取本公司辖属5个浆站的血浆留样，每个浆站随机抽取100份，用已经建立并验证的VZV-IgG定量ELISA检测VZV-IgG,筛选出VZV-IgG效价≥3.000 0 IU/mL的合格血浆，并建立合格血浆对应的献浆员名单(编号202201);按照名单202201与2020年筛选的合格(以VZV-IgG效价≥1.500 0 IU/mL为合格血浆标准)献浆员名单(编号2020),在本公司2022年12月尚未出库的血浆中找到名单中献浆员对应的所有未出库血浆，取小样检测VZV-IgG效价，2轮检测结果汇总，确定VZV-IgG效价稳定保持的时间，按照更新合格献浆员名单的同时滚动收集其对应的未出库血浆的流程建立合格血浆采集方案。按照该方案在本公司辖属另外8个浆站中筛选出更多合格献浆员(名单编号202202)和合格血浆。随机截取100份合格血浆留样进行混合，检测其VZV-IgG效价，确定原料血浆筛选标准是否合理；汇总1 300份血浆的VZV-IgG效价检测结果，计算较高效价VZV-IgG在健康人群中的比例，进行部分成本核算。结果 按照202201和2020合格献浆员名单共追溯到121份未出库的合格献浆员血浆，其中202001名单(48人)中仅有15名合格献浆员，在2022年未出库血浆中找到79份血浆，大部分献浆员超过2年后血浆中的抗体效价明显下降，仅有1名献浆员的血浆在2022年仍然合格；202201名单的8名合格献浆员中有7人对应的32份血浆保持较高效价VZV-IgG(最低效价>2.500 0 IU/mL),保持时间最长为8个月；以同样的收浆标准检测其余8个浆站800份血浆获得15名合格献浆员(名单编号202202)。按照追溯合格献浆员滚动收集合格血浆的采集方案，本次1 300份血浆初筛共获得合格献浆员23人，占比1.76%,获得对应的未出库的合格血浆152袋，其中15名为1年内连续献浆5次以上的献浆员，最长连续献浆时间达8个月。随机截取100份合格血浆的小样制备的合并血浆的VZV-IgG效价为5.527 5 IU/mL,达到VZIG(IV)的投料标准(≥4.500 0 IU/mL);用该方案采集合格的原料血浆预计减少血浆检测量约7 336份，可以大幅缩小检测人群的范围，极大降低检测成本。结论 采用追溯合格献浆员滚动采集较高效价VZV-IgG血浆的方案可用于小规模VZIG制备所需原料血浆的快速、高效采集。
2024年04期 v.52 34-41页 [查看摘要][在线阅读][下载 1007K] [下载次数：60 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 黎子君;洪以翔;蔡璇琳;曹世雄;孙晓麟;
目的 通过系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)患者的临床数据和外周血淋巴细胞亚群水平，分析SLE患者继发感染和继发严重感染的危险因素，进一步探究淋巴细胞亚群与SLE继发严重感染的关系。方法 收集SLE患者的临床数据，使用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群水平；比较SLE患者感染组和非感染组临床数据的差异；比较SLE患者感染组、非感染组和健康对照组淋巴细胞亚群的差异；使用多因素二元逻辑回归分析SLE患者发生感染的危险因素；进一步比较SLE患者严重感染组、非严重感染组和健康对照组淋巴细胞亚群的差异，再采用多因素二元逻辑回归分析淋巴细胞亚群对SLE患者继发严重感染的危险因素，绘制出受试者工作特征曲线(即ROC曲线),分析其对SLE患者继发严重感染的临界值。结果 研究共纳入382名SLE患者，发生感染的患者有94名，感染发生率为24.6%。其中，严重感染为4.5%。最常见的感染部位是肺，占43.7%;其次是上呼吸道，占13.6%。最常见的病原体是细菌，占64.9%;其次是病毒，占12.8%。与非感染组相比，SLE患者感染组外周血中的CD4~+ T细胞、CD8~+ T细胞水平显著下降(P均<0.05),B细胞和NK细胞差异无统计学意义(P>0.05)。多因素二元逻辑回归分析SLE患者继发感染的危险因素为C反应蛋白(P=0.012)、白蛋白(P=0.005)以及激素用量(P=0.026)。与SLE患者非严重感染组和健康对照组相比，严重感染组的CD4~+ T细胞、CD8~+ T细胞、B细胞和NK细胞均减少，差异均有统计学意义(P均<0.05)。NK细胞(P=0.039,P<0.05)和红细胞沉降率(P=0.037,P<0.05)是SLE患者继发严重感染的危险因素，其中NK细胞诊断SLE继发严重感染临界值为18个/μL,诊断的敏感性和特异性分别为93.2%和77.8%。结论 从SLE病例数据分析，SLE患者发生感染的危险因素为：白蛋白的减少、激素用量增加和C反应蛋白水平增加。外周血NK细胞减少是SLE患者继发严重感染的危险因素，可能对SLE患者继发严重感染具有很好的预测价值。
2024年04期 v.52 42-50页 [查看摘要][在线阅读][下载 1400K] [下载次数：215 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 袁芳;尹旋旋;冀国霞;魏军;
目的 分析2016—2023年青州市水痘(varicella)的流行病学特征，为完善水痘防控措施提供依据。方法 通过中国疾病预防控制信息系统收集2016—2023年青州市水痘报告病例数据，用描述性流行病学方法进行分析。结果 2016—2023年，青州市共报告水痘病例414例，年均报告发病率为5.43/10万；2016—2019年发病率呈上升趋势(χ~2=63.00,P<0.001),2020—2023年发病率呈下降趋势(χ~2=66.01,P=0.001,P<0.05)。全年均有发病，每年4—6月和10月至次年1月为发病高峰期。全市13个街道(镇、区)均有病例发生，其中云门山街道发病率最高(119例，16.55/10万),其次为经济开发区(32例，6.32/10万)和王府街道(72例，5.88/10万);庙子镇发病率最低(7例，2.26/10万)。发病人群男女性别比例为1.17∶1。发病较多的年龄组为10～<15岁组、15～<20岁组、20～<25岁组，病例数分别为74例(17.87%)、130例(31.40%)、64例(15.46%),主要集中于学生、农民和散居儿童。青州市1～<20岁人群水痘疫苗第1剂次接种率为94.80%,第2剂次接种率为76.41%,其中1～<5岁组第1剂次和5～<10岁组第1剂次、第2剂次接种率均较高，15～<20组第1剂次、第2剂次接种率均偏低。结论 青州市现有的免疫策略改变了水痘的流行病学特征，使发病年龄后移，中学生和大学生是水痘疫情的高发人群，因此扩大水痘疫苗接种覆盖面和开展加强免疫是非常有必要的。
2024年04期 v.52 51-55页 [查看摘要][在线阅读][下载 888K] [下载次数：202 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 陆献蒿;田红艳;农智;陆夏瑜;易斌;
目的 对百色市某高中一起诺如病毒(norovirus)感染暴发疫情的流行特征及流行因素进行调查，为学校诺如病毒感染疫情提供防控依据。方法 根据病例定义开展搜索，采用描述性流行病学方法对病例特征进行三间分布描述，收集病例的临床数据，采集可疑环境样本及具有代表性病例的生物标本进行实验室检测，结合现场卫生学调查分析暴发原因。结果 2021年1月20—28日，本次疫情共累计报告病例205例，其中疑似病例189例，确诊病例11例，隐性感染者5例。临床症状主要以腹泻(90.50%)、呕吐(35.50%)为主，无重症及死亡病例。男性罹患率5.85%(116/1 984)高于女性罹患率3.74%(89/2 381)。高中3个年级学生均有病例报告，但高三罹患率最高，为10.39%,发病风险是高一、高二学生的5.90倍(95%CI:4.473～7.778)。对72份肛拭子、外环境涂抹标本进行诺如病毒GI型、GII型实验室检测，检出16份肛拭子呈GⅡ型诺如病毒核酸阳性。流行曲线显示人传人模式，1月29日学生放假全部离校后无病例报告。结论 本事件为一起GⅡ型诺如病毒感染导致的学校暴发疫情，学校未及时采取有效控制措施，最终导致学校暴发疫情的暴发。应加强病例排查及管理，规范吐泻物消毒处理，避免类似事件再次发生。
2024年04期 v.52 56-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 1013K] [下载次数：560 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 诸菲蓝;刘沐桑;
细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)是一组细胞分泌的纳米囊泡，在细胞间的通讯中发挥重要作用。研究指出，人类致病真菌释放的细胞外囊泡在调节宿主免疫反应方面发挥重要作用。它们可以与宿主免疫系统相互作用并引发多种结果，进而影响真菌感染疾病的进展，具有临床应用于真菌感染治疗的潜力。现就常见的人类致病真菌EVs在免疫激活与免疫抑制中的作用作一概述，并展望真菌囊泡临床应用的前景。
2024年04期 v.52 61-65页 [查看摘要][在线阅读][下载 837K] [下载次数：203 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 何运兴;张艳;
淋巴细胞(lymphocytes)在抗肿瘤和抗感染中扮演着关键角色，探寻其功能的调控机制是一个重要的研究课题。铁死亡(ferroptosis)是一种新型的细胞死亡方式，主要通过脂质过氧化作用破坏细胞膜，最终导致细胞的裂解和死亡。铁死亡在许多细胞代谢(如淋巴细胞)的免疫应答中扮演着关键角色。探究铁死亡在淋巴细胞免疫应答中的作用，不仅可以加深对淋巴细胞生长和发育的了解，而且有助于寻找更为有效的抗肿瘤和抗感染策略。现就铁死亡的分子机制及其对T、B、NK细胞免疫功能的影响作一概述。
2024年04期 v.52 66-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 1184K] [下载次数：272 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 高然;傅生芳;
佐剂(adjuvant)是增强和调节疫苗抗原免疫反应的增强剂，与抗原一起使用能使机体产生更强或更平衡的免疫反应。近年来，重组蛋白疫苗、核酸疫苗等新型疫苗是疫苗的研发热点，尤其是重组蛋白疫苗，通常存在免疫原性弱或辅助性T细胞(helper T cells, Th)1/Th2免疫反应不平衡等问题，需要添加佐剂以改善疫苗的免疫效果，因而佐剂开发就成为该类疫苗研发的焦点之一。疫苗佐剂种类繁多且机制复杂，主要分为递送类佐剂、免疫激动剂及复合佐剂等。现就已获批的人用疫苗佐剂以及具有潜力的部分新型佐剂从其作用机制和临床或临床前应用等方面作一概述，为人用疫苗佐剂的相关研究提供理论和应用参考。
2024年04期 v.52 74-81页 [查看摘要][在线阅读][下载 893K] [下载次数：1233 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 张晓昕;李薇;
狂犬病(rabies)是由狂犬病毒(rabies virus)感染引起的一种严重威胁人类安全的急性传染病。虽然狂犬病灭活疫苗能够有效预防狂犬病毒感染，但存在接种剂次多、成本高等缺点，亟需研发有效、价格适中的新型狂犬病疫苗。近年，病毒载体疫苗、亚单位疫苗、核酸疫苗、佐剂疫苗和嵌合疫苗等新型狂犬病疫苗被研究用于防治狂犬病毒感染。现就新型狂犬病疫苗的研发情况、保护效果及其在预防狂犬病病毒感染等方面作一概述。
2024年04期 v.52 82-87页 [查看摘要][在线阅读][下载 845K] [下载次数：765 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 仝泽辉;杜宗敏;
细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)是细菌在生长过程中由出芽形成的纳米球状小泡，与细菌的外膜和周质具有相似的组成，且有良好的免疫原性、自佐剂活性和易于被免疫细胞摄取的特性，已成为一种新兴的疫苗研发平台。目前，OMVs疫苗已成功应用于预防B群脑膜炎球菌，针对其他病原体的OMVs疫苗也逐步进入临床阶段。通过基因工程对细菌进行遗传改造，可提高OMVs产量，减少其内毒素毒性并呈递抗原。现就OMVs疫苗的研究进展作一概述。
2024年04期 v.52 88-95页 [查看摘要][在线阅读][下载 1069K] [下载次数：705 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 蒋若云;王玉;
银屑病(psoriasis)是与免疫相关的、易复发的慢性炎症性皮肤病，目前还不能完全治愈。银屑病病因和发病机制复杂，炎症因子释放导致的免疫细胞失衡和功能紊乱是银屑病发病的关键。近年来，肠道菌群代谢物与炎症性疾病的研究越来越多，让人们对于肠道菌群代谢物的认识更加深入。胆汁酸(bile acid, BA)是在肠道菌群作用下生成的具有生物活性的代谢产物之一，具有调节免疫平衡、抑制炎症反应、维护内环境稳态等功能。现就BA与银屑病的关系以及相关作用机制作一概述，以期为银屑病的治疗提供新思路。
2024年04期 v.52 96-100页 [查看摘要][在线阅读][下载 832K] [下载次数：361 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] 下载本期数据